- 产品品牌
reagen
- 生产厂家
reagen
- 产品性状
液态
- 主要成份
试剂盒
- 包装规格
96t
- 贮存方法
2-8°
- 产品有效期
12月
- 批准文号
reagen
- 商品名
新城疫病毒(NDV)核酸检测试剂盒
新城疫病毒(NDV)核酸检测试剂盒
【名称】
中文名:新城疫病毒(NDV)核酸检测试剂盒
英文名:Newcastle disease virus Polymerase Chain Reaction (PCR) Diagnostic Kit
【目的】
本试剂盒适用于检测禽肉、禽类组织脏器、禽类排泄物和分泌物等标本中新城疫病毒(NDV)mRNA,适用于新城疫病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【原理】
本试剂盒用一对新城疫病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用一步法荧光PCR对新城疫病毒RNA进行体外扩增检测,从而达到快速检测之目的。
【试剂组成】
名 称
数 量
规 格
逆转录酶系
1 管
40μl/管
Taq酶系
1 管
40μl/管
NDV qPCR MIX
1 管
800μl/管
NDV阳性质控品
1 管
100μl/管
阴性质控品
1 管
250μl/管
DEPC水
1 管
2000μl/管
【储存条件】-20℃保存,避免反复冻融。
【试剂规格及有效期】40头份/盒,有效期6个月。
【标本采集】
1. 适用标本类型:禽肉、禽类组织脏器、禽类排泄物和分泌物,培养物等。
2. 标本采集:
2.1 组织:将禽类处死,取心、肝、脾、肺、肾、小肠、鸡肉、胰腺等组织,冻存于-70℃冰箱中,密封送检。
2.2 培养物等液体标本:取组织液1~3ml,转至无菌5ml玻璃管中,密封送检。
2.3咽拭子:用棉拭子取咽喉分泌物,将棉拭子置入盛有1.0 ml PBS的离心管中,密封送检。
2.4泄殖腔拭子:用棉拭子深入泄殖腔转一圈,沾粪便,将棉拭子置入转至盛有1.0 ml PBS的离心管中,密封送检。
2.5血清:用无菌注射器取2~3ml全血,转至无菌5ml玻璃管中,待析出血清后,将血清转至1.5ml的清洁离心管中,密封送检。
【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃。但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
【适用仪器】取得资格认证的荧光定量PCR仪。
【使用方法】
1.RNA提取
用户可选用商业化试剂盒提取RNA,如Qiagen病毒RNA提取试剂盒,或维伯鑫病毒RNA提取试剂盒(磁珠法)(货号:RR-0128)。
2.PCR扩增
从试剂盒中取出NDV qPCR MIX、Taq酶系、逆转录酶系室温融化并振荡混匀后,10,000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂
NDV qPCR MIX
逆转录酶系
Taq酶系
用量
20μl
1μl
1μl
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10,000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入22μl,向每管中加入处理后样品(所获得的RNA样品)或NDV阳性质控品和阴性质控品3μl,10,000rpm瞬时离心30秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内,按对应顺序设置阴性质控品,阳性质控品以及未知标本,并设置样品名称、标记荧光基团种类(报告基团为FAM,淬灭基团为TAMRA)和循环条件:
ABI7500等使用薄壁管的仪器,循环条件:42℃→20分钟,后94℃→2分钟,后94℃ 30秒→55℃ 45秒,40个循环。
LightCycler等使用毛细管的仪器,循环条件: 42℃→20分钟,94℃→2分钟,后94℃ 5秒→58℃ 45秒, 40个循环。
3. 结果分析判定
反应结束后,使用手动调整阈值使阴性质控品Ct 值在40以上,Ct 值小于35个循环的为阳性;Ct 值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。重复试验之后,如果Ct 值仍然在35-40个循环之间,判断为阳性,没有荧光值增长为阴性。
【质控标准】
阴性质控品:全部阴性。
NDV -阳性质控品:阳性对照的 Ct 值均应小于 30,且呈标准S型扩增曲线。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效,全部试验应重新进行。
【注意事项】
1. 使用前请仔细阅读说明书。并且严格按照说明书进行操作。
2. 试剂盒内各种组分使用前应充分融化混匀并经高速短暂离心后试用。
3. 所有使用的离心管、 Tip 头应用DEPC水处理并高压灭菌,而且必须不含 RNase 。
4. 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
5. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。